Dimero D prueba Cualitativa

Prueba inmunológica de aglutinación en látex que emplea partículas de látex revestidas con un anticuerpo monoclonal especifico para el dominio del dímero D en la fibrina. Estas partículas de látex forman agregados macroscópicos solo en presencia de derivados soluble de la fibrina que contienen el dominio del Dímero D. Debido a que la lisis del coagulo por parte de la Plasmina produce un conjunto heterogéneo de productos de degradación de la fibrina con mas de un dominio del dímero D por molécula. El único anticuerpo del anti dímero D utilizado como revestimiento en partículas de látex provocará aglutinación de estas partículas en presencia del antígeno.

La fibrina reticulada se forma cuando la trombina fracciona el fibrinógeno para formar monómeros de fibrina. Estos se polimerizan espontáneamente y son reticulados por el factor XIIIa. La trombina se necesita para fraccionar el fibrinógeno y para activar al factor XIII. La formación de la Plasmina se desencadena cuando se forma un coagulo de fibrina. La Plasmina degrada la fibrina y el fibrinógeno. Los productos de degradación del fibrinógeno (PDF) resultantes NO contienen dominio del Dímero D reticulado, por lo tanto no son reconocidos por los análisis del Dímero D.

Por ejemplo aglutinación de látex tradicional son métodos manuales en los que el parámetro de valoración se detecta en forma visual.

Materiales:

®      Muestra de plasma del paciente CITRATADO. Se puede conservar la muestra durante 4 horas a temperatura ambiente o 2 semanas a -20 grados centígrados.

®      Portaobjetos de mezclado

®      Varilla de mezclado ó palillos

®      Vortex

®      Micropipetas

®      Tubos de ensayo.

Kit de Dimero D

®      Control positivo y negativo

®      Suspensión de látex (almacenar a 2-8 grados centígrados)

®      Solución tampón (fosfato /azida de sodio)

Procedimiento:

 

   

Muestras y reactivos	Muestra diluida ½
Muestra (plasma)	100 µl
Solución tamponada o Buffer	100 µl

CONSIDERACIONES GENERALES:

Ø  Si La lectura se realiza después de 3 minutos, la suspensión de látex se puede secar y dar un patrón de aglutinación falso. En caso de duda repetir la prueba.

 

Ø  Si la muestra arroja resultados positivos es necesario realizar diluciones hasta obtener negatividad, así:

 

 

Reactivo y Muestra	Dilución 1/2	Dilución 1/4	Dilución 1/8
Plasma	100 µl	100 dilución 1/2 µl	100 dilución 1/4 µl
Solución tampón o buffer	100 µl	100 µl	100 µl